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CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)系統是繼ZNF和TALENS技術之后的第三代基因編輯技術,被廣泛應用于細胞水平和個體水平基因編輯細胞系和模式動物的建立。
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CRISPR/Cas9系統利用sgRNA/Cas9復合體識別并在DNA特異位點造成雙鏈斷裂,利用細胞自身修復機制或者與外源DNA同源重組實現基因敲、敲入和序列突變。
金開瑞應用CRISPR/Cas9技術,為您提供細胞系基因敲除/敲入/突變等服務,全方位滿足您對基因功能研究方面的各項需求。

技術優勢

操作簡單,靶向精確性更高;
可實現對多個靶基因位點或多個靶基因的同時敲除/敲入/突變;
適用于人、大鼠、小鼠以及部分其他哺乳動物等各種細胞系的靶向敲除/敲入/突變。

服務內容

基因敲除細胞系建立;
基因敲入細胞系建立;
基因定點突變細胞系建立。

服務流程

  • 接收訂單
  •  
  • 基因評估
  •  
  • sgRNA設計
  •  
  • 表達sgRNA和Cas9蛋白的慢病毒包裝
  •  
  • 感染細胞
  •  
  • 細胞藥物篩選
  •  
  • 混合細胞PCR檢測
  •  
  • 細胞分孔,挑取單克隆
  •  
  • 單克隆擴大培養后PCR測序檢測
  •  
  • 結果交付

客戶提供

目的基因序列信息(Gen Bank Accession number、Gene ID、關鍵詞);
細胞類型及名稱(也可選擇由金開瑞代購),細胞培養條件。

最終交付

sgRNA序列;
基因敲除/敲入/突變單克隆細胞系;
sgRNA-Cas9基因敲除/敲入/突變質粒鑒定測序結果;
結題報告(包括實驗步驟、測序結果及相關原始圖片)。

案例展示

Cas9技術敲除細胞系構建案例:

Step 1: sgRNA設計

Step 2: 細胞抗藥性篩選預實驗

Step 3:轉染效率測試:明場和綠色熒光

Step 4: 藥物篩選、單克隆培養及單克隆細胞系靶點檢測



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